|
همسانه سازی ژن virG و ساخت سازه جهش یافته pGEM∆virG به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا دیسانتری بومی
|
حورا احمدی دانش1   ، مجتبی سعادتی 2، محمد درودیان3 ، باقر یخچالی4 ، علی اصغر کارخانه5 ، سیدمصطفی حسینی6 ، مختار زارع7 ، مهرداد هاشمی8 |
1- دانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی سلولی و مولکولی، گروه زیست شناسی سلولی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)
2- دکترای باکتری شناسی، گروه زیست شناسی سلولی، دانشکده علوم، دانشگاه امام حسین (ع) ، m_saadati@yahoo.com
3- دانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی سلولی و مولکولی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران مرکز، باشگاه پژوهشگران جوان
4- دکترای میکروبیولوژی، گروه صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
5- دکترای ژنتیک مولکولی، گروه صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
6- باشگاه پژوهشگران جوان، دانشگاه آزاد اسلامی، ، واحد علوم تحقیقات
7- پژوهشگر، گروه زیست شناسی سلولی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)
8- دکترای ژنتیک مولکولی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد پزشکی تهران |
|
|
چکیده: (16283 مشاهده) |
سابقه و هدف: بیماری شیگلوز از علل عمده ابتلا کودکان به اسهال در ایران است و ژن virG نقش کلیدی را در بیماری‌زایی و قدرت تهاجم باکتری شیگلا بازی می‌کند. هدف از این مطالعه، همسانه سازی، توالی یابی ژن virG و ساخت سازه جهش یافته pGEM∆virG به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا بومی با هدف ساخت سویه کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته است.
روش بررسی: با استفاده از آزمون‌های بیوشیمیایی، سویه شیگلای بومی بررسی و ژن virG در حامل pGEM-7zf همسانه‌سازی و سپس توالی نوکلئوتیدی آن تعیین گردید. بر اساس اطلاعات حاصل از توالی یابی، نقشه برش آنزیمی حامل نوترکیب pGEMvirG استخراج و نسبت به حذف نواحی از ژن virG با استفاده از واکنش هضم آنزیمی اقدام شد. در نهایت، سازه pGEM∆virG با به کار گیری روش شیمیایی به باکتری اشرشیاکلی تراریخت سازی گردید.
یافته‌ها: سویه شیگلای بومی تایید گردید. توالی‌یابی ژن virG در پایگاه داده‌های ژنومیNCBI) ) ثبت گردید. سازه pGEM∆virG یک ساختار جهش یافته از ژن virG در باکتری اشریشیاکلی را شامل می‌شود که 1751 جفت باز از آن، از طریق واکنش هضم آنزیمی حذف شده است.
نتیجه‌گیری: استفاده از تکنیک تبادل آللی بر پایه بهره گیری از رخداد نوترکیبی در باکتری ها یکی از موثرترین روش های ایجاد گسستگی در ژن های هدف می باشد. این ساختار جهش یافته می تواند به منظور ایجاد سویه کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته شیگلا دیسانتری مورد استفاده قرار گیرد. |
|
| واژه‌های کلیدی: تبادل آللی، شیگلا دیسانتری، ژنvirG، کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته |
|
|
متن کامل [PDF 401 kb]
(2670 دریافت)
|
نيمه آزمايشي : تجربي |
موضوع مقاله:
زيست شناسي مولكولي
دریافت: 1391/7/2 | انتشار: 1391/6/25
|
|
|
|
|
|
